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熒光蛋白（fluorescent protein）屬于一種可視化的報(bào)告基因編碼蛋白，在一定的波長下可發(fā)出明亮熒光，它的特點(diǎn)有熒光穩(wěn)定、容易檢測、對細(xì)胞無毒害、無需底物和無物種特異性等。常見的有綠色熒光蛋白、紅色熒光蛋白等。

綠色熒光蛋白（GFP）簡述及應(yīng)用：
綠色熒光蛋白（GFP）是一個由約238個氨基酸組成的具有潛力的標(biāo)記物，分子量約27kDa。熒光基團(tuán)能夠自身催化組成生色團(tuán)，通過紫外光或藍(lán)光激發(fā)時發(fā)出可見的綠色熒光，熒光性質(zhì)穩(wěn)定、具有無可比擬的優(yōu)勢。
GFP的純化：
1、用PCR擴(kuò)增出綠色熒光蛋白(GFP)基因
2、插入到pGEX-KG表達(dá)載體中,并將構(gòu)建出的重組質(zhì)粒命名為pKG- GFP
3、將重組載體導(dǎo)入大腸桿菌DH10β中,經(jīng)IPTG誘導(dǎo)產(chǎn)生GST-GFP融合蛋白

紅色熒光蛋白（RFP）簡述及應(yīng)用
紅色熒光蛋白（RFP）是一種會發(fā)光的蛋白質(zhì)，通過它可以看到細(xì)胞的活動，進(jìn)行更深入的研究。RFP異源二聚體是由ddRFPA1蛋白和ddRFPB1蛋白聚合而成。
RFP熒光對PNGase酶活性檢測：
1、利用定點(diǎn)突變將N-糖基化位點(diǎn)引入ddRFP
2、突變體在大腸桿菌里(無糖基化系統(tǒng))表達(dá)后獲得紅色熒光二聚體
3、建立酵母表達(dá)系統(tǒng)(有糖基化系統(tǒng))對蛋白進(jìn)行表達(dá),獲得糖基化蛋白產(chǎn)物
4、將蛋白做體外混合實(shí)驗(yàn),通過測定混合物去糖基化后的熒光強(qiáng)度變化檢測PNGase的活性

【熒光標(biāo)記的組蛋白】：
FITC-Histone
CY3-Histone
CY5-Histone
CY5.5-Histone
CY7-Histone
CY7.5-Histone
ICG-Histone

【熒光標(biāo)記血紅蛋白】：
Hemoglobin-CY5
Hemoglobin-CY3
Hemoglobin-CY5.5
Hemoglobin-CY7.5
Hemoglobin-CY7
Hemoglobin-FITC

【熒光標(biāo)記核仁蛋白】：
Nucleohistone-CY5
Nucleohistone-CY3
Nucleohistone-CY5.5
Nucleohistone-CY7.5
Nucleohistone-CY7
Nucleohistone-ICG
Nucleohistone-FITC